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Glicómica del cáncer cervicouterino

El cáncer cervicouterino representa la segunda causa de muerte por cáncer en la mujer. Durante la transformación maligna ocurren numerosas alteraciones celulares, uno de los cambios característicos de las células cancerosas ocurre a nivel de la glicosilación. La glicosilación es la modificación co- y pos-traduccional estructuralmente más elaborada y de mayor diversidad, esta modificación tiene un impacto importante en la función y estructura de las proteínas. Algunos de estos cambios a nivel de la glicosilación se refieren a incrementos en la expresión de estructuras oligosacarídicas ramificadas, síntesis de estructuras cortas o truncadas y aumento de ácido siálico en la superficie celular, entre otros. Resultados previos en nuestro grupo mostraron un aumento en la expresión de ácido siálico tanto en enlace α2,3 como α2,6 en lesiones premalignas de cérvix así como del antígeno tumoral sialil Lewis(x). En pacientes con CaCu también se ha identificado un aumento de ácido siálico total en suero y en biopsias de tumores. La identificación de nuevas estructuras tipo carbohidrato permitirá encontrar posibles blancos no solo para el diagnóstico temprano y el pronóstico de la enfermedad sino también como posibles blancos terapéuticos, sobre todo en aquellas estructuras que participen en la invasión y metástasis de la célula tumoral.Con la finalidad de desarrollar métodos de detección temprana, se buscarán estructuras glicánicas como posibles marcadores para el cáncer cervicouterino y lesiones premalignas. Dado que los cambios en la expresión de estructuras glicánicas se ha asociado con mayor capacidad de invasión y metástasis, la identificación de algunas estructuras en tumores malignos podría ayudar en el diagnóstico-pronóstico de la enfermedad. Los cambios en la expresión de estructuras glicánicas está asociado con el incremento en la expresión de genes involucrados en la glicosilación, nuestro grupo de investigación ha encontrado un aumento en los niveles de ARNm de tres genes de sialiltransferasas (ST3Gal III, ST3Gal IV y ST6Gal I), enzimas involucradas en la transferencia de ácido siálico a las cadenas de carbohidratos. El análisis del patrón de expresión de genes que participan en el proceso de glicosilación, permitirá identificar a aquellos que modifican su expresión en lesiones premalignas y en CaCu, la identificación de un gen o grupos de genes que alteran su expresión podría ser utilizada en el desarrollo de métodos de diagnóstico de la enfermedad. Polimorfismos en regiones promotoras se ha asociado con algunas enfermedades. Estudios preliminares de nuestro grupo, en los que se analizó la región promotora B3 del gen de la ST3Gal IV de dos líneas celulares de cérvix (C33A y SiHa), se identificaron cambios en la secuencia del promotor, que modifican de manera importante su actividad. Los resultados sugieren que estos cambios puntuales en regiones promotoras podrían ser importantes para modificar la expresión de los genesin vivo. A la fecha no existen marcadores tumorales sensibles y específicos para el diagnóstico del CaCu, por lo que la búsqueda de métodos más sensibles, específicos, y no invasivos continúa. Objetivo: Caracterizar la glicómica del cáncer cervicouterino e identificar biomarcadores para el diagnóstico temprano y pronóstico de la enfermedad. Los biomarcadores podrán ser estructuras glicánicas expresadas en las células malignas, proteínas que modifiquen su patrón de glicosilación, genes que modifiquen su expresión, o polimorfismos asociados con la enfermedad. Material y métodos. Se obtendrán muestras de mujeres con diagnóstico citológico normal, con lesión escamosa intraepitelial de bajo y alto grado, y con cáncer. El análisis de la expresión de estructuras glicánicas y carbohidratos se realizará mediante microarreglos de tejidos y microscopía confocal o bien, para el caso de los raspados cervicales se realizará por citometría de flujo empleando en ambos casos un panel de lectinas y anticuerpos monoclonales. En el presente proyecto también se identificarán proteínas con cambios en el patrón de glicosilación para su uso potencial como biomarcadores, para ello se realizarán ensayos de electroforesis de doble dimensión, detección de estructuras glicánicas mediante lectinas o anticuerpos marcados seleccionados con base en los resultados de microscopía confocal y citometría de flujo, para finalmente identificar la proteína por MALDI-TOF. Se hará una comparación del perfil de expresión de genes involucrados en la glicosilación celular mediante ensayos de microarreglos de expresión por RT-PCR en tiempo real. Los genes que muestren cambios en sus niveles de ARNm mediante microarreglosse analizarán en células neoplásicas seleccionadas de las muestras biológicas mediante microdisección y posterior ensayo de RT-PCR en tiempo real. Se identificarán polimorfismos en regiones promotoras de genes de glicosiltransferasas que muestren cambios en su nivel de expresión, esto se hará mediante ensayos de PCR para amplificar regiones promotoras y el secuenciamiento de las mismas.

Evaluación de la expresión de galectina 4 en pacientes con cáncer cervicouterino y caracterización de su función en células de cérvix

Antecedentes. La galectina-4 es una proteína que pertenece a la subfamilia de galectinas compuestas por dos dominios de reconocimiento de carbohidratos en la misma cadena polipeptídica. La galectina-4 reconoce lactosa y estructuras de azúcares relacionadas. El aumento en su nivel de expresión en ciertos tipos celulares disminuye la capacidad de migración, invasión y proliferación. En pacientes con ciertos tipos de cáncer la disminución de su expresión en el tejido tumoral y el aumento en la expresión en el suero se ha relacionado con un mal pronóstico, pobre supervivencia, alta recurrencia y un aumento en la metástasis. En cáncer cervicouterino no existen reportes sobre su expresión. Resultados preliminares de nuestro grupo en los que se analizaron cambios en la expresión de genes en tumores malignos de cérvix se identificó una disminución en la expresión del gen LGALS4 que codifica para la galectina-4. Objetivo. Determinar el nivel de expresión de la galectina-4 en el suero y tejido de pacientes con cáncer cervicouterino y determinar su papel en líneas celulares de cérvix. Material y métodos. A partir de biopsias de cérvix incluidas en parafina se determinará el nivel de expresión de galectina-4 mediante técnicas histoquímicas empleando anticuerpos monoclonales, la expresión de galectina-4 en suero se determinará mediante la técnica de ELISA. El papel de la galectina-4 en funciones celulares como proliferación, migración, adhesión e invasión se evaluará en células silenciadas empleando el equipo Incucyte.

Expresión de galectina 9 en cáncer cervicouterino: marcador predictivo de respuesta al tratamiento y supervivencia.

El cáncer cervicouterino (CaCu) es un problema de salud pública en los países en vías de desarrollo. En México el CaCu representa la segunda causa de muerte por cáncer en la población femenina. El uso de biomarcadores que aporten información al médico para dar seguimiento a las pacientes y determinar de manera temprana una recidiva o persistencia de la enfermedad no se utilizan en este tipo de cáncer. Por ello proponemos el análisis de expresión de la proteína galectina-9 (Gal-9) en tejido y suero previo al tratamiento y el seguimiento de la misma a través del tiempo sólo en el suero. La Gal-9 es una proteína que participa en funciones celulares como adhesión, migración, quimio-atracción, modulación de señales entre el crecimiento y la apoptosis. Debido a los efectos que puede desencadenar la Gal-9, su expresión se ha relacionado con el grado de progresión tumoral y con el desarrollo de metástasis en varios tipos de cáncer. En tumores de CaCu se reportó una disminución en la expresión de Gal-9 asociada con menor grado de diferenciación. La Gal-9 es una proteína que también se encuentra en suero y algunos estudios reportan cambios en su concentración relacionados con el cáncer. En el suero de pacientes con CaCu se reportó un aumento en la concentración de Gal-9. Recientemente nuestro grupo de investigación, identificó también un aumento en la concentración de Gal-9 en el suero de pacientes con CaCu, la concentración de esta proteína varió de manera importante dentro de este grupo de pacientes, lo que nos lleva a determinar si las diferencias en concentración se asocian con respuesta al tratamiento y sobrevida. El estudio incluirá una cohorte formada por pacientes con CaCu. Se incluirán en el estudio mujeres que acudan por primera vez y que no han recibido ningún tratamiento, además, se incluirán pacientes que ya iniciaron tratamiento, con la finalidad de armar diferentes grupos de estudio. En todos los casos la expresión de Gal-9 en tejido tumoral se hará a partir del tejido incluido en parafina que se utilizó para el diagnóstico inicial. La determinación de la concentración de Gal-9 en el suero de las mujeres, se realizará previo al tratamiento y se dará un seguimiento a través del tiempo, tomando una segunda muestra al concluir el mismo y cada seis meses durante 5 años (se dará continuidad al proyecto). De las mujeres que se encuentran en tratamiento o en seguimiento se tomarán muestras de sangre y se harán subgrupos considerando el tiempo de evolución de la enfermedad, el estatus de la paciente (libre de enfermedad, recidiva, persistencia de la enfermedad). Se formará un grupo en el que se incluirán biopsias de mujeres con lesiones premalignas, se utilizarán los bloques incluidos en parafina de las pacientes. Así mismo, se solicitará una muestra de sangre solo para aquellas que acudan por primera vez y no hayan recibido algún tipo de tratamiento. Los tejidos normales se tomarán de úteros extirpados por miomatosis uterina o bien de aquellas mujeres en las que el estudio patológico haya resultado sin alteraciones citológicas. Solo se incluirán pacientes que hayan firmado la carta de consentimiento informado. La identificación de Gal-9 en tejido, se realizarán mediante microarreglos de tejidos, utilizando anticuerpos monoclonales. La expresión de Gal-9 se evaluará mediante una reacción colorimétrica. Las imágenes de la Gal-9 serán digitalizadas mediante el programa ImageScope (Leica Biosystems). La concentración de Gal-9 en suero se realizará mediante la técnica de ELISA (Human Galectin-9 Quantikine ELISA Kit, RD Systems) cuantificando en el lector Synergy (Biotech). Correlación entre la expresión de Gal-9 y las variables clínico-patológicas será determinado usando las pruebas de Pearson Chi-cuadrada y Fisher Exact Test. La sobre vida se determinará con los modelos de Kaplan-Meier y Cox proportional Hazard.

Determinación de modificaciones epigenéticas del gen de Galectina-9 en tumores de cáncer cervicouterino y la relación con su nivel de expresión

El cáncer cervicouterino (CaCu) es la segunda causa de muerte por cáncer en la mujer mexicana. El agente etiológico del CaCu es el Virus del Papiloma Humano (VPH) en especial los genotipos de alto riesgo, como VPH-16 y 18. En la patogenia viral juegan un papel importante las oncoproteínas E6 y E7, al causar una desregulación del ciclo celular al degradar proteínas clave, activar oncogenes y silenciar genes supresores de tumores. Su efecto sobre la expresión de genes lo realiza a través de diferentes mecanismos: uno de ellos es resultado de las modificaciones epigenéticas que pueden ejercer estas proteínas virales sobre el genoma de la célula infectada. En el desarrollo de diferentes carcinomas, se ha visto que hay una alteración en la expresión de galectinas. Estos cambios se han asociado al fenotipo maligno y al pronóstico de la enfermedad. Un estudio señala que la Galectina 9 (Gal-9) disminuye su expresión durante la transformación maligna del cérvix, encontrándose ausente en algunos tumores. Los cambios en la expresión de Gal-9 se han relacionado con un mal pronóstico de vida para el paciente y en algunos tipos de cáncer, como el de mama los niveles de expresión de esta proteína se relacionan con el grado de invasión, metástasis y pronóstico de la enfermedad. Poco se sabe sobre los factores que pueden afectar la expresión de este gen. Objetivo. Determinar modificaciones epigenéticas del gen de Galectina-9 en tumores de cáncer cervicouterino y la relación con su nivel de expresión. Material y métodos. La determinación de Gal-9 se realizará mediante ensayos histoquímicos, empleando anticuerpos monoclonales. La metilación en islas CpG del promotor del gen LGALS9 se realizará a través del tratamiento de ADN extraído de los tumores con bisulfito, amplificación de fragmentos del promotor y posterior secuenciación de los fragmentos amplificados. Se evaluará la acetilación de las histonas H3 y H4 por ChIP (Inmunoprecipitación de cromatina, por sus siglas en inglés) y amplificando regiones promotoras de LGALS9.

  • Doctorado 2001
    Université des Sciences et Technologies de Lille, Francia
    Título de la Tesis: Les acides sialiques comme récepteurs viraux et les enzymes impliquées dans leur expression. Obtención del grado con mención honorífica
  • Maestría 1995
    Universidad Nacional Autónoma de México
    Título de la Tesis: Regulación de la Transcripción de los Oncogenes E6 y E7 del virus de Papiloma Humano tipo 18 por el gen H-ras y sitios de respuesta a glucocorticoides. Mención honorífica en el examen de Maestría
  • Licenciatura 1990
    Universidad Nacional Autónoma de México
    Título de la tesis: Secuencias Repetidas en el ADN de Taenia solium y Taenia saginata.